विषय
लिस एक ग्रीक शब्द है और इसका अर्थ है "विभाजित करना" या "विघटित करना"। यह प्रतिक्रिया का एक अच्छा वर्णन है जो एक लिसीस बफर में कोशिकाओं के साथ होता है, एक समाधान जो उन्हें अपनी सामग्री निकालने के लिए तोड़ देता है। सेल विश्लेषण में डीएनए या प्रोटीन निकालने के लिए वैज्ञानिक इन समाधानों का उपयोग करते हैं, खासकर बैक्टीरिया के मामले में। सेल lysis बफर का प्रकार प्रयोग के प्रकार के आधार पर भिन्न होता है, हालांकि हम कुछ सामान्य विकल्पों का उल्लेख करेंगे।
बफर और नमक
बफर समाधान पीएच को स्थिर करते हैं, जबकि कोशिकाएं लसीका प्रक्रिया से गुजरती हैं। यदि पीएच वांछित है तो त्रिकोणीय-एचसीएल समाधान पीएच 8 में बफरिंग के लिए सबसे आम बफर है। HEPES इन प्रयोगों में एक और सामान्य बफर समाधान है। सोडियम क्लोराइड को आयनिक शक्ति बढ़ाने के लिए भी जोड़ा जा सकता है, कोशिकाओं के बाहर विलेय की कुल सांद्रता। उत्तरार्द्ध महत्वपूर्ण है क्योंकि पानी कम सेल सांद्रता वाले क्षेत्रों से फैल सकता है, कम सांद्रता वाले क्षेत्रों से उच्च एकाग्रता वाले क्षेत्रों में।
डिटर्जेंट
डिटर्जेंट मुख्य घटक है जो कोशिका झिल्ली को भंग कर देता है ताकि सामग्री बच सके। डिटर्जेंट एम्फीपैथिक अणु होते हैं, जो कि एक छोर के साथ होते हैं जो आसानी से पानी के अणुओं के साथ बातचीत करते हैं जबकि दूसरा हाइड्रोफोबिक अंत होता है, या "जो पानी से डरता है", उस बातचीत को नहीं करता है। वे मिसेल, छोटे समूह बनाकर वसा को भंग कर सकते हैं, जिसमें डिटर्जेंट अणुओं के हाइड्रोफोबिक पूंछ वसा अणुओं की ओर इशारा करते हैं। आम डिटर्जेंट सोडियम डोडेसिल सल्फेट या एसडीएस, एनपी -40 और ट्राइटोनएक्स हैं।
चेलेंजिंग एजेंट और इनहिबिटर
Lysis बफ़र्स में आमतौर पर एथिलीन डायएमेनेट्राएसेटिक एसिड (EDTA) या रेतीलीन ग्लाइकॉल टेट्राऐसेटिक एसिड (EGTA) जैसे चेलेटिंग एजेंट भी होते हैं। ये रसायन धातु आयनों को +2 आवेश (उदाहरण के लिए, मैग्नीशियम और कैल्शियम) के साथ बाँधते हैं, जिससे वे अन्य प्रतिक्रियाओं के लिए अनुपलब्ध हो जाते हैं। कई डीएनए (प्रोटीन जो डीएनए को चबाते हैं) और प्रोटीज़ (प्रोटीन जो अन्य प्रोटीन को काटते हैं) को काम करने के लिए मैग्नीशियम आयनों की आवश्यकता होती है, इसलिए उन्हें इस मुख्य घटक, ईडीटीए और ईजीटीए से वंचित करके, वे प्रोटीज़ के स्तर को कम करने में मदद करते हैं या डीएनए गतिविधि। हालांकि, वे उन्हें पूरी तरह से बाहर नहीं करते हैं, और कुछ प्रोटीन्स मैग्नीशियम कोफ़ैक्टर्स पर निर्भर नहीं करते हैं, इसलिए लिसी बफ़र्स में कभी-कभी प्रोटीज इनहिबिटर नामक पदार्थ भी होते हैं, जो इसे बांधते हैं और इसे ठीक से काम करने से रोकते हैं।
क्षारीय लसीका
बैक्टीरिया से प्लास्मिड को शुद्ध करने के लिए क्षारीय लसीका एक बहुत ही सामान्य तकनीक है। इस पद्धति का अर्थ है तीन समाधानों का उपयोग। पहले में ग्लूकोज, ट्रिस-एचसीएल बफर, ईडीटीए और आरएनएएस शामिल हैं। ग्लूकोज बैक्टीरिया के बाहर विलेय की एक उच्च सांद्रता बनाता है, जिससे वे थोड़ा परतदार हो जाते हैं, जिससे लसीका प्रक्रिया आसान हो जाती है। EDTA और ट्रिस-एचसीएल पहले वर्णित के रूप में काम करते हैं, जबकि आरएनएएस सेल के अंदर किसी भी आरएनए को चबाने के लिए इसे रास्ते से बाहर निकाल देंगे। दूसरा समाधान प्रभावी रूप से सेल लसीका करता है। इसमें डिटर्जेंट एसडीएस और NaOH शामिल है, जो सेल के अंदर प्रोटीन को बदनाम करने और डीएनए को सरल फिलामेंट में अलग करने के लिए पीएच को 12 या उससे ऊपर उठाता है। तीसरे समाधान में पीएच को अधिक तटस्थ स्तर पर बहाल करने के लिए पोटेशियम एसीटेट होता है, ताकि प्लास्मिड डीएनए स्ट्रैंड एक साथ आ सकें। इस बीच, विकृत प्रोटीन एक साथ आते हैं और अवक्षेपित होते हैं, जबकि डोडेसिल सल्फेट आयन एक अघुलनशील यौगिक बनाने के लिए पोटेशियम आयनों के साथ जुड़ते हैं, जो समाधान से भी बाहर निकल सकते हैं।