जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए समस्या निवारण

वीडियो: जेल वैद्युतकणसंचलन सामान्य गलतियाँ #1

विषय

दिशाओं
युक्तियाँ
चेतावनी
आपको क्या चाहिए

Polyacrylamide gel वैद्युतकणसंचलन, या पृष्ठ, एक जैविक नमूने में कार्बनिक अणुओं के पृथक्करण के लिए उपयोग की जाने वाली तकनीक है। जब एक विद्युत प्रवाह लागू किया जाता है तो छोटे आकार और वजन के अणु पॉलीक्रैलेमाइड जेल में अधिक तेजी से पलायन करते हैं। तीव्र विशिष्ट बैंड आमतौर पर देखा जाता है जब पूरा जेल एक स्थान पर लगाया जाता है। यह अपेक्षाकृत सरल विधि है। हालांकि, बैंड की अनुपस्थिति, ऐसे बैंड जो धुंधले होते हैं या जो स्पष्ट नहीं होते हैं, वे विधि के एक या अधिक चरणों में समस्या का संकेत दे सकते हैं। आपको जेल वैद्युतकणसंचलन विधि की समस्याओं को हल करने के लिए मूल दिशानिर्देशों का पालन करना चाहिए जिसमें परिणाम अपेक्षित नहीं हैं।

दिशाओं

जेल वैद्युतकणसंचलन प्रोटीन या डीएनए नमूनों के अलगाव के लिए एक आम तरीका है (वृहस्पति / कॉम्स्टॉक / गेटी इमेजेज)

जेल वैद्युतकणसंचलन के अंतिम चरण से शुरू करें और पीछे हटने का कार्य करें। जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए, अंतिम चरण नमूना बैंड का निरीक्षण करने के लिए इस्तेमाल की जाने वाली धुंधला प्रक्रिया है। धुंधला प्रक्रिया के दौरान वास्तव में कुछ समस्याएं उत्पन्न होनी चाहिए। हालांकि, जेल को दाग करने के लिए उपयोग करने से पहले दाग डाई को उचित बफर में अच्छी तरह से भंग कर देना चाहिए। जांचें कि सही डाई एकाग्रता का उपयोग किया गया है।
शक्ति स्रोत की जाँच करें। बैंड की अनुपस्थिति यह संकेत दे सकती है कि वर्तमान या वोल्टेज कॉन्फ़िगरेशन बहुत अधिक है और परीक्षण नमूने जेल से बाहर निकलते हैं। उच्च सेटिंग्स भी जेल के माध्यम से नमूना घटकों को जल्दी से स्थानांतरित करने का कारण बन सकती हैं, जिसके परिणामस्वरूप खराब रिज़ॉल्यूशन और अस्पष्ट बैंड होते हैं। यदि पावर स्रोत कॉन्फ़िगरेशन कम है, तो नमूने जेल के माध्यम से पलायन नहीं कर सकते हैं। नमूने उस कुएं में भी जमा हो सकते हैं जहां वे लोड किए गए थे और जेल के माध्यम से पलायन नहीं करते थे।
Polyacrylamide जेल को परिवर्तित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले तरल एक्रिलामाइड की जाँच करें। आमतौर पर, एक polyacrylamide जेल पर्वतमाला को 5% से 15% तक परिवर्तित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले एक्रिलामाइड का प्रतिशत। बड़े अणुओं से बने नमूनों को 5% जेल पर लोड किया जाता है क्योंकि बड़े टुकड़ों में एक्रिलामाइड के उच्च प्रतिशत के साथ जेल में अधिक धीरे-धीरे चलते हैं। छोटे अणुओं को उच्च प्रतिशत जेल पर लोड किया जाता है क्योंकि जेल की एक कम सांद्रता छोटे नमूनों को संसाधित करने में सक्षम नहीं होगी।
एक्रिलामाइड को पॉलीमराइज़ करने के लिए उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों की जाँच करें। एक पॉलिक्रीलामाइड जेल एक तरल मिश्रण के बहुलकीकरण से बनता है जिसमें बिस-एक्रिलामाइड और एक्रिलामाइड शामिल होते हैं। अमोनियम persulphate और TEMED जेल गठन को उत्प्रेरित करने के लिए एक्रिलामाइड में जोड़ा जाता है। आमतौर पर, एक्रिलामाइड को पॉलीमराइजेशन (जेल बनाने) के लक्षण दिखाने चाहिए, इसके 15 मिनट बाद अमोनियम सॉल्वेट और TEMED जोड़ दिया जाता है। पॉलिमराइजेशन जो बहुत तेजी से होता है, बड़ी मात्रा में अमोनियम के सताए जाने का परिणाम है। अपर्याप्त होने पर, यह अपूर्ण या असमान पोलीमराइजेशन का कारण बन सकता है।
लोड किए गए नमूनों की मात्रा की पुष्टि करें। उच्च नमूना सांद्रता जेल के माध्यम से धीरे-धीरे आगे बढ़ सकते हैं और बैंड रिज़ॉल्यूशन को कम कर सकते हैं। जेल के दाग लगने के बाद कम नमूना सांद्रता नहीं देखी जा सकती है। ये रंजक नमूने की न्यूनतम मात्रा पर सीमाएं प्रस्तुत करते हैं जिन्हें रंग संवेदनशीलता के परिणामस्वरूप कल्पना की जा सकती है।
लोड किए गए नमूनों की गुणवत्ता की पुष्टि करें। एक नमूने में मौजूद लवण और अन्य दूषित पदार्थ जेल के साथ नमूने की गति को प्रभावित कर सकते हैं। इलेक्ट्रोफोरेसिस एक प्रवाहकीय विद्युत प्रवाह वाले जेल के माध्यम से विद्युत प्रवाह पारित करने का परिणाम है; नमूने में लवण की उच्च सांद्रता जेल के माध्यम से इस धारा की गति को प्रभावित कर सकती है। एक नमूने को अलग करते समय, अपेक्षाकृत शुद्ध नमूने का उत्पादन करने के लिए एक शुद्धि किट को शामिल किया जाना चाहिए।
प्रयोग करने के लिए सही "पृष्ठ" का उपयोग किया गया था या नहीं यह निर्धारित करने के लिए साहित्य या लिखित प्रोटोकॉल की समीक्षा करें। "पृष्ठ" में एक्रिलामाइड का प्रतिशत परीक्षण किए जाने वाले नमूने के आकार के लिए विशिष्ट है। साहित्य ऊर्जा स्रोत की स्थापना और नमूने की प्रवासन दर के बारे में विशिष्ट जानकारी भी प्रदान कर सकता है।

युक्तियाँ

प्रदान किए गए दिशानिर्देश जैविक अनुसंधान में अनुप्रयोगों के लिए सामान्य हैं।
किसी भी प्रयोगशाला प्रक्रिया को हल करते समय, अंतिम चरण के साथ शुरू करना और समस्या को निर्धारित करने के लिए पूर्वव्यापी रूप से काम करना सबसे अच्छा है।

चेतावनी

एक्रिलामाइड और पॉलीक्रिलामाइड को संभालते समय दस्ताने पहनें। एक्रिलामाइड एक न्यूरोटॉक्सिक अभिकर्मक है और इसे त्वचा के माध्यम से अवशोषित किया जा सकता है। Polyacrylamide न्यूरोटॉक्सिक नहीं है, हालांकि, इसमें अक्सर unpolymerized acrylamide होता है और इसे अभी भी विषाक्त माना जा सकता है।